一、污染類型識別
細(xì)菌污染
顯微鏡下可見球形或桿狀微生物，培養(yǎng)液迅速渾濁并散發(fā)異味，細(xì)胞生長停滯。
真菌污染
培養(yǎng)液保持清亮，但可見絲狀或珊瑚狀菌絲，細(xì)胞狀態(tài)逐漸惡化。
支原體感染
細(xì)胞生長緩慢，出現(xiàn)小黑點(diǎn)或空泡化，但培養(yǎng)液無明顯渾濁。
黑膠蟲污染
顯微鏡下可見點(diǎn)狀游動小體，對細(xì)胞生長影響較小，但可能干擾觀察。
二、清除技術(shù)方案
（一）細(xì)菌與真菌污染處理
抗生素處理
在培養(yǎng)基中添加慶大霉素（50-100μg/mL）或兩性霉素B（2.5μg/mL），連續(xù)處理3-5天。需注意長期使用可能影響細(xì)胞代謝。
物理清除
對污染嚴(yán)重的細(xì)胞系，建議棄用并徹-底消毒培養(yǎng)箱（75%酒精擦拭+紫外線照射），更換水盤為飽和硫酸銅溶液。
（二）支原體清除方案
專用培養(yǎng)基
使用含Plasmocin™的支原體清除培養(yǎng)基，處理周期需持續(xù)2-3周。
聯(lián)合處理
結(jié)合四環(huán)素類抗生素（10μg/mL）與細(xì)胞凍存復(fù)蘇，通過低溫沖擊清除頑固支原體。
（三）管路系統(tǒng)污染防控
生物膜清除
采用復(fù)合型過氧化氫（H2O2）溶液循環(huán)沖洗管路，3-5分鐘可穿透生物膜結(jié)構(gòu)，殺滅銅綠假單胞菌等頑固微生物。
長效抑菌
處理后在管路內(nèi)壁形成納米級抑菌層，有效降低氣溶膠傳播的霉菌污染風(fēng)險。
三、預(yù)防體系構(gòu)建
三級細(xì)胞庫管理
建立主細(xì)胞庫（MCB）、工作細(xì)胞庫（WCB）和實(shí)驗(yàn)細(xì)胞庫（ECB），每代次進(jìn)行支原體PCR檢測。
操作規(guī)范
嚴(yán)格執(zhí)行雙人核對制度，超凈臺內(nèi)物品擺放不超過工作區(qū)1/3面積，定期更換HEPA濾膜。
環(huán)境監(jiān)測
每周對培養(yǎng)箱、超凈臺進(jìn)行沉降菌檢測，保持相對濕度<60%以抑制真菌繁殖。
